Asam amino pembangun protein adalah asam amino esensial yang tidak dapat disintesis atau tidak dapat dihasilkan oleh tubuh dan asam amino non esensial yang dapat disintesis oleh tubuh. Salah satu metode yang digunakan untuk analisis asam amino adalah kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT). Tujuan dilakukan penelitian ini adalah untuk mengetahui kemampuan KCKT dengan fase diam C-18 untuk menganalisis asam amino dengan derivatisasi menggunakan ninhidrin dan kondisi optimum untuk menganalisis asam amino. Asam amino yang dipisahkan dalam penelitian ini adalah histidin, leusin, metionin. Hasil penelitian yang didapat berupa waktu retensi dan luas area yang didapat dari hasil perbandingan beberapa metode dengan kondisi yang berbeda. Kondisi KCKT yang didapat yaitu fase gerak berupa metanol:air 60:40 fase diam Purospher C18 150 mm x 4,6mm suhu 400C laju alir 1 mL/menit dengan volume injeksi 20 μl deteksi pada 570 nm belum mampu untuk memisahkan campuran asam amino.