Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh jenis mulsa dan dosis pupuk kandang ayam terhadap pertumbuhan dan hasil tanaman mentimun (Cucumis sativus L.). Penelitian dilaksanakan di Kebun Percobaan Fakultas Pertanian dan Perikanan Universitas Muhammadiyah Purwokerto menggunakan rancangan petak terbagi (split plot) dengan dua faktor, yaitu jenis mulsa (mulsa batang jagung, plastik perak-hitam, mulsa jerami, dan biomulsa kacang pintoi) sebagai petak utama, serta dosis pupuk kandang ayam (0, 10, dan 20 ton/ha) sebagai anak petak. Hasil penelitian menunjukkan bahwa perlakuan mulsa memberikan pengaruh nyata terhadap tinggi tanaman dan jumlah daun, dengan perlakuan mulsa jerami memberikan hasil tertinggi pada semua umur pengamatan. Dosis pupuk kandang ayam 20 ton/ha berpengaruh nyata terhadap tinggi tanaman pada fase awal pertumbuhan (21 HST). Interaksi antara jenis mulsa dan dosis pupuk kandang ayam menunjukkan pengaruh nyata pada tinggi tanaman umur 21 HST, dengan kombinasi mulsa jerami dan pupuk kandang ayam 20 ton/ha (M3K2) menghasilkan tinggi tanaman tertinggi. Namun, pada variabel generatif seperti jumlah buah, panjang buah, diameter buah, dan bobot buah total, tidak ditemukan pengaruh nyata baik dari faktor tunggal maupun interaksinya. Penelitian ini menunjukkan bahwa pemanfaatan mulsa jerami dan pupuk kandang ayam secara tepat dapat meningkatkan pertumbuhan vegetatif tanaman mentimun.