Menstruasi merupakan kondisi pengeluaran darah, lendir, dan jaringan sel yang mengalami destruksi dari vagina yang berasal dari dinding rahim secara periodik. Pengeluaran darah yang cukup banyak pada saat menstruasi dapat mengakibatkan resiko anemia. Anemia mengindikasikan adanya peningkatan zat besi dalam pembentukan hemoglobin. Pengeluaran zat besi yang tidak seimbang selama menstruasi akan menyebabkan kadar hemoglobin rendah. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui ada tidaknya perbedaan kadar hemoglobin sebelum dan sesudah menstruasi pada mahasiswi Program Studi Teknologi Laboratorium Medik D4 Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Muhammadiyah Purwokerto. Penelitian ini menggunakan desain observasional analitik dengan rancangan cross sectional. Penelitian dilaksanakan pada bulan April-Juli 2020 dengan jumlah sampel sebanyak 39 responden secara total sampling. Penelitian dianalisis dengan menggunakan uji Wilcoxon. Terdapat beda nyata kadar hemoglobin sebelum dan sesudah menstruasi (P = 0,000).