Antioksidan merupakan senyawa pemberi elektron atau reduktan dan dapat menghambat reaksi oksidasi dengan mengikat radikal bebas dan molekul yang sangat reaktif. Akibatnya kerusakan sel akan dihambat. Mangifera indica L. dikenal sebagai tumbuhan mangga dengan sumber antioksidan alami yang kuat. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengisolasi senyawa antioksidan yang terdapat dalam fraksi etil asetat daun mangga gedong menggunakan kromatografi kolom dan menguji aktivitas antioksidan isolat yang didapat menggunakan metode DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil). Fraksinansi dilakukan secara refluks menggunakan pelarut n-heksana dilanjut dengan etil asetat. Hasil fraksinasi dipekatkan. Fraksi kental kemudian diisolasi dengan kromatografi kolom. Sebagai penyerap pada kolom digunakan silika gel 60 dan eluen yang digunakan adalah n-heksana : etil asetat secara gradien. Setiap isolat yang diperoleh dari kromatografi kolom dianalisis dengan KLT dan pereaksi semprot DPPH. Isolat yang mengandung senyawa antioksidan kemudian dikelompokan berdasarkan nilai Rf yang sama dan dianalisis menggunakan spektrofotometri UV-Vis untuk mendapatkan nilai IC50. Hasil yang didapat nilai IC50 fraksi etil asetat 5,306 ppm, sedangkan nilai IC50 isolat A, isolat B, isolat C secara berturut-turut sebesar 6,145 ppm, 8,885 ppm dan 6,952 ppm dengan kontrol positif vitamin C sebesar 8,011 ppm. Dari hasil yang didapat nilai IC50 fraksi etil asetat paling kuat di antara yang lainnya.