Kanker payudara merupakan kanker yang paling banyak menimbulkan kematian pada wanita di Indonesia sebanyak 48.998. Pengobatan kanker dengan menggunakan obat kemoterapi 5FU masih kurang efektif dan memiliki efek samping yang merugikan, sehingga diperlukan agen ko-kemoterapi yang dapat meningkatkan efektifitas dan mengurangi efek samping dari agen kemoterapi. Bawang Dayak (Sisyrinchium palmifolium L.) merupakan salah satu tanaman yang memiliki aktivitas antikanker. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui aktivitas sitotoksik fraksi n-heksana bawang dayak dan kombinasi dengan 5FU terhadap sel kanker payudara T47D serta untuk mengetahui golongan senyawa yang terkandung di dalamnya. Uji sitotoksik dilakukan dengan menggunakan metode MTT Assay. Golongan senyawa dalam FHBD diidentifikasi menggunakan Kromatografi Lapis Tipis (KLT). Uji sitotoksik tunggal FHBD dan 5FU ini menggunakan seri konsentrasi 25 – 500 μg/mL. Nilai IC50 yang diperoleh FHBD dan 5FU berturut - turut 100 μg/mL dan 90 μg/mL yang termasuk dalam kategori moderat. Uji sitotoksik kombinasi antara FHBD dan 5FU pada konsentrasi rendah menimbulkan efek antagonis (CI > 1,1) dan pada konsentrasi tinggi menimbulkan efek sinergis (CI 0,3-0,7). Hasil skrining fitokimia dari FHBD terdapat golongan senyawa alkaloid, fenolik, dan saponin steroid. Kesimpulannya, FHBD dapat digunakan sebagai agen ko-kemoterapi 5FU karena memiliki efek sinergis ketika dikombinasikan.