Media pembelajaran mempunyai arti yang sangat penting pada proses pembelajaran. Namun sebagian guru masih belum bisa membuat dan menggunakan media pembelajaran dalam proses pembelajaran. Salah satu cara membuat multimedia adalah dengan memanfaatkan hasil dari identifikasi jenis-jenis tanaman dilingkungan kita. Penelitian ini bertujuan untuk membuat multimedia interaktif offline pada materi keanekaragaman hayati menggunakan bahan hasil identifikasi jenis-jenis tanaman berkayu di sekitar kampus I Universitas Muhammadiyah Purwokerto. Metode pembuatan multimedia interaktif dengan program software ispring presenter 8 menggunakan metode penelitian pengembangan (Development Research) oleh Vaughan (2011). Multimedia interaktif disusun berdasarkan pada kurikulum 2013 biologi SMA kelas X K.D. 3.7 yaitu mendeskripsikan keanekaragaman gen, jenis, ekosistem melalui kegiatan pengamatan. Tahap utama penyusunan terdiri dari tahap perencanaan, desain dan produksi. Data hasil identifikasi diperoleh 77 spesies tanaman berkayu yang ada di kampus I UMP. Data yang diperoleh selanjutnya diolah menjadi multimedia interaktif. Hasilnya menunjukkan bahwa data hasil identifikasi dapat diterapkan kedalam multimedia interaktif offline. Output multimedia interaktif offline dikemas dalam DVD/CD dengan format movie exe. Untuk mengetahui kelayakan penggunaan dalam pembelajaran, multimedia yang dibuat ini diuji publik dengan responden guru dan siswa. Respon guru dan siswa terhadap multimedia interaktif sangat baik. Hal ini ditunjukkan antara lain: prosentase guru menyatakan telah sesuai dengan pencapaian K.D. 3.7 (93,33 %), kualitas gambar dan teks sudah baik (100 %), dapat digunakan untuk pembelajaran pada materi keanekaragaman hayati (100 %) dan mempermudah penyampaian materi keanekaragaman hayati (100 %). Namun hanya 80 % guru yang setuju dengan item pernyataan : musik pengiring dan sound telah sesuai dengan multimedia pembelajaran, dan multimedia interaktif tersebut mudah untuk dioperasikan. Berdasarkan hasil tersebut dapat disimpulkan bahwa multimedia interaktif yang telah dibuat digunakan sebagai media pembelajaran pada materi keanekaragaman hayati SMA kelas X.