Organizational citizenship behavior merupakan perilaku kerja sukarela yang melampaui tuntutan formal pekerjaan dan berperan penting dalam meningkatkan efektivitas serta kinerja organisasi. Penelitian ini bertujuan untuk menganalisis pengaruh etika kerja Islami dan budaya organisasi terhadap organizational citizenship behavior pada tenaga kependidikan Universitas Muhammadiyah Purwokerto. Pendekatan penelitian yang digunakan adalah kuantitatif dengan metode survei. Subjek penelitian berjumlah 119 tenaga kependidikan yang dipilih melalui teknik proportional random sampling. Pengumpulan data dilakukan menggunakan tiga skala, yaitu Skala Etika Kerja Islami, Skala Budaya Organisasi, dan Skala Organizational Citizenship Behavior yang telah melalui uji validitas dan reliabilitas. Analisis data dilakukan menggunakan analisis regresi linier berganda dengan bantuan program SPSS versi 25. Hasil penelitian menunjukkan bahwa etika kerja Islami dan budaya organisasi secara simultan berpengaruh signifikan terhadap organizational citizenship behavior. Hasil analisis menunjukkan bahwa etika kerja Islami berpengaruh terhadap organizational citizenship behavior sebesar 33,2%, sedangkan budaya organisasi memiliki pengaruh sebesar 49,2%. Secara simultan, etika kerja Islami dan budaya organisasi memiliki pengaruh sebesar 59,2% terhadap organizational citizenship behavior, sementara sisanya dipengaruhi oleh variabel lain di luar penelitian. Dengan demikian, penguatan Etika Kerja Islami dan Budaya Organisasi dapat meningkatkan organizational citizenship behavior tenaga kependidikan di Universitas Muhammadiyah Purwokerto.