Sildenafil Sitrat golongan obat keras yang hanya dapat diperoleh dan hanya dapat digunakan berdasarkan resep dokter. Sildenafil Sitrat merupakan obat yang digunakan untuk penanganan disfungsi ereksi pada pria. Efek Sildenafil Sitrat dapat menyebabkan sakit kepala, pusing, dispepsia, mual, nyeri perut, gangguan pengelihatan, rhinitis (radang hidung), infrak miokard, nyeri dada, palpitasi (denyut jantung cepat) dan kematian. Penelitian ini bertujuan untuk mengidentifikasi apakah sediaan jamu tradisional kuat lelaki merek X dan Y mengandung sildenafil sitrat dan untuk melakukan validasi metode. Analisis sildenafil sitrat dalam sampel jamu dilakukan secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT). Dalam analisis ini mengunakan fase diam C18 dan fase gerak asetonitril dan dapar fosfat dengan perbandingan (60:40) dengan detektor UV 290 nm. Sampel jamu diperoleh dari daerah Purwokerto Provinsi Jawa Tengah. Hasil uji liniearitas menunjukan nilai r = 0,999; a = -116,130; b = 1073,269; batas deteksi metode adalah 0,102 µg/ml dan batas kuntitas metode adalah 0,341 µg/ml. Uji akurasi diperoleh dari nilai perolehan kembali sebesar 108,6679 %. Uji presisi menunjukan nilai RSD sebesar 1,353 %. Hasil penetapan kadar jamu merek X sebesar 0,317 mg/g. Metode KCKT yang digunakan dalam penelitian ini dapat digunakan untuk analisis sildenafil sitrat dalam jamu tradisional kuat lelaki merek X dan Y. Dari hasil yang diperoleh pada analisis sildenafil sitrat dalam jamu yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa jamu merek X terdapat sildenafil sitrat sedangkan jamu merek Y tidak terdapat sildenafil sitrat.