Reaksi yang sering terjadi akibat radikal bebas adalah reaksi oksidasi. Reaksi oksidasi yang berlebihan di dalam tubuh terhadap asam nukleat, protein, lemak, dan DNA dapat menginisiasi timbulnya penyakit jantung koroner, katarak, penuaan dini, dan bahkan dapat menyebabkan kanker. Aktivitas radikal bebas dapat dihambat oleh kerja antioksidan. Salah satu tanaman yang diyakini memiliki aktivitas antioksidan adalah putri malu (Mimosa pudica Linn.). Penelitian sebelumnya melaporkan bahwa senyawa aktif pada ekstrak putri malu yang memiliki aktivitas antioksidan tersebut adalah flavonoid dan fenolik dengan nilai IC50 126,71 ppm. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antioksidan pada subfraksi-subfraksi hasil pemisahan dari fraksi metanol-air daun putri malu. Fraksi metanol-air daun putri malu disubfraksinasi menggunakan kromatografi kolom dan didapat 6 subfraksi. Subfraksi I tidak diuji sedangkan subfraksi II-VI digunakan untuk uji aktivitas antioksidan metode DPPH. Vitamin C digunakan sebagai kontrol positif. Hasil menunjukkan bahwa nilai IC50 vitamin C, ekstrak, fraksi metanol-air, dan subfraksi II-VI berturut-turut 8,429 ± 0,258; 10,877 ± 0,478; 17,801 ± 0,116; 1486,521 ± 104,851; 1937,101 ± 466,289; 489,377 ± 37,089; 331,029 ± 19,951; dan 493,622 ± 78,534 ppm. Dapat disimpulkan bahwa Subfraksi II-VI tidak memiliki aktivitas antioksidan.